علامة البروتين الملونة (10-250 كيلو دالتون)

تحتوي علامة البروتين الملونة هذه على 11 بروتينًا نقيًا تتراوح من 10 كيلو دالتون إلى 250 كيلو دالتون، مع ألوان شريطية مصممة لسهولة التعرف عليها أثناء الرحلان الكهربائي. يظهر النطاق 72 كيلو دالتون باللون البرتقالي، والنطاق 25 كيلو دالتون باللون الأخضر، والنطاقات التسعة المتبقية باللون الأزرق. تُستخدم هذه العلامة بشكل شائع لمراقبة كفاءة فصل البروتين في الفصل الكهربائي للهلام بولي أكريلاميد SDS، وتقييم أداء نقل اللطخة الغربية على أغشية PVDF، أو النايلون، أو النيتروسليلوز، وتقدير الوزن الجزيئي للبروتين في سير العمل الروتيني في المختبر. في مختبرات علم الأنسجة حيث يتم تحضير أقسام الأنسجة باستخدام مشراح البارافين، يتم استخدام هذه العلامة بشكل متكرر كمرجع لمراقبة الجودة للتحقق من سلامة البروتين قبل تحليل المقايسة المناعية النهائية على نفس العينات المشتقة من الأنسجة. يتم توفير العلامة جاهزة للاستخدام في مخزن التحميل المؤقت ولا تتطلب أي تسخين أو تخفيف أو إضافة عوامل اختزال قبل تحميل العينة.

تضمن التركيبة العازلة استقرار البروتين والهجرة الكهربية المتسقة. للحصول على أفضل النتائج، يجب إذابة قلم التحديد في درجة حرارة الغرفة، وخلطه جيدًا قبل الاستخدام، وعدم غليه. يوصى بحجم عينة يتراوح من 5 إلى 10 ميكرولتر لكل بئر، مع 5 ميكرولتر عادة ما يكون كافيًا لتصور النطاق الواضح في المواد الهلامية 5 × 1.5 مم. يجب على المستخدمين لأول مرة تحديد التحميل الأمثل من خلال التجارب المسبقة بناءً على ظروف الجل المحددة والعادات التجريبية لتحقيق التوازن بين التكلفة وجودة الصورة. وينبغي تجنب الإفراط في تمديد الوقت الكهربائي لأنه قد يسبب انتشار الفرقة. تعتمد المختبرات التي تستخدم طابعة الكاسيت المدمجة وطابعة الشرائح لتحديد عينات الأنسجة ووضع العلامات عليها أيضًا على هذه العلامة كمعيار مرجعي لسير عمل الكشف عن البروتين باتباع إجراءات الصبغ المناعي على أقسام الأنسجة.

تعتبر علامة البروتين هذه مناسبة لمجموعة واسعة من تطبيقات الكشف المناعي، بما في ذلك التحقق من النشاف الغربي ونقل البروتين. بعد النقل، يمكن تحليل بيانات النطاق التجريبي بشكل أكبر باستخدام قياس الكثافة أو برامج التصوير لتقدير البروتين شبه الكمي. في سير عمل التصوير المتقدم، يمكن استخدام نظام التحليل الكمي للأنسجة والتصوير الخلوي ثنائي الأبعاد/ثلاثي الأبعاد لقياس أنماط التعبير البروتيني عبر أقسام الأنسجة بأكملها، حيث تعمل هذه العلامة كمرجع للوزن الجزيئي للتحليل النهائي. يجب تخزين العلامة عند -20 درجة مئوية لمدة تصل إلى 12 شهرًا، أو عند 4 درجات مئوية لمدة تصل إلى 3 أشهر بعد الذوبان مع الخلط الدقيق. وينبغي تجنب دورات التجميد والذوبان المتكررة؛ ينصح بالاقتباس للاستخدام المنتظم. غالبًا ما تُستخدم معدات الدعم مثل Paraffin Wax Melter وParaffin Trimmer جنبًا إلى جنب مع هذه العلامة في سير عمل التشريح المرضي المتكامل، حيث يتم إجراء معالجة الأنسجة والتضمين والتقسيم وتحليل البروتين بالتسلسل. وينبغي اتباع ممارسات السلامة المختبرية القياسية، بما في ذلك معاطف المختبر والقفازات التي تستخدم لمرة واحدة، أثناء المناولة.