علامة بروتينية ملونة مسبقة التلوين (10-18 كيلو دالتون)

تحتوي علامة البروتين هذه على 10 بروتينات منقاة تتراوح من 10 كيلو دالتون إلى 180 كيلو دالتون، مع ألوان شريطية مميزة لسهولة التعرف عليها أثناء الترحيل الكهربائي. يظهر النطاق 70 كيلو دالتون باللون البرتقالي، والنطاق 10 كيلو دالتون باللون الأخضر، والنطاقات الثمانية المتبقية باللون الأزرق. ويستخدم على نطاق واسع لمراقبة فصل البروتين في SDS-PAGE، وتقييم كفاءة النقل الغربي على أغشية PVDF، أو النايلون، أو النيتروسليلوز، وتقدير الوزن الجزيئي للبروتين في سير العمل الروتيني في المختبر. في مختبرات علم الأنسجة حيث يتم تحضير أقسام الأنسجة باستخدام مشراح البارافين، يتم استخدام هذه العلامة بشكل متكرر كأداة لمراقبة الجودة للتحقق من سلامة البروتين قبل تحليل المقايسة المناعية النهائية على نفس العينات المشتقة من الأنسجة. يتم توفير العلامة جاهزة للاستخدام في مخزن التحميل المؤقت ولا تتطلب إضافة عامل تسخين أو تخفيف أو تقليل قبل تحميل العينة.

تشتمل التركيبة المنظمة على 62.5 ملي مولار تريس-فوسفات عند درجة حموضة 7.5، و2% SDS، و5 ملي مولار EDTA، و0.02% بروكلين 300، و33% جلسرين. تضمن هذه الصيغة استقرار البروتين والهجرة الكهربية المتسقة. للحصول على أفضل النتائج، يجب إذابة قلم التحديد في درجة حرارة الغرفة، وخلطه جيدًا قبل الاستخدام، وعدم غليه. يوصى بحجم عينة من 5 إلى 10 ميكرولتر لكل بئر، مع 5 ميكرولتر عادة ما يكون كافيًا لتصور النطاق الواضح في المواد الهلامية 5 × 1.5 مم. يجب على المستخدمين لأول مرة تحديد التحميل الأمثل من خلال التجارب المسبقة بناءً على ظروف الجل الخاصة بهم. قد يتسبب الرحلان الكهربائي المفرط في انتشار النطاق ويجب تجنبه. تعتمد المختبرات التي تستخدم طابعة الكاسيت المدمجة وطابعة الشرائح لتحديد عينات الأنسجة ووضع العلامات عليها أيضًا على هذه العلامة كمعيار مرجعي لسير عمل الكشف عن البروتين باتباع إجراءات الصبغ المناعي على أقسام الأنسجة.

تعتبر علامة البروتين هذه مناسبة لمجموعة واسعة من تطبيقات الكشف المناعي، بما في ذلك التحقق من النشاف الغربي ونقل البروتين. بعد النقل، يمكن قياس بيانات النطاق التجريبي بشكل أكبر باستخدام نظام التحليل الكمي للأنسجة والتصوير الخلوي ثنائي الأبعاد/ثلاثي الأبعاد لتقدير البروتين شبه الكمي. قد تختلف نطاقات الوزن الجزيئي المرئية بحوالي 5% بين دفعات الإنتاج. يجب تخزين العلامة عند -20 درجة مئوية لمدة تصل إلى 24 شهرًا، أو عند 4 درجات مئوية لمدة تصل إلى 3 أشهر بعد الذوبان مع الخلط الدقيق. وينبغي تجنب دورات التجميد والذوبان المتكررة؛ ينصح بالاقتباس للاستخدام المنتظم. غالبًا ما تُستخدم معدات الدعم مثل Paraffin Wax Melter وParaffin Trimmer جنبًا إلى جنب مع هذه العلامة في سير عمل التشريح المرضي المتكامل، حيث يتم إجراء معالجة الأنسجة والتضمين والتقسيم وتحليل البروتين بالتسلسل. وينبغي اتباع ممارسات السلامة المختبرية القياسية، بما في ذلك معاطف المختبر والقفازات التي تستخدم لمرة واحدة، أثناء المناولة.